产品货号：
BTN15-M0001
中文名称：
人BRAF基因1799T>A点突变qPCR检测试剂盒
英文名称：
产品规格：
50T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本制品是我公司开发的专门检测1799T>A突变的探针法qPCR检测试剂盒。
保存：-20℃，有效期1年。
使用前需要将引物探针干粉管短暂离心后加入220μL的自备超纯水，震荡混匀后再取用，一次没用完剩下的需要放-20℃保存。
一、样品DNA的制备
二、点突变Probe qPCR反应
以20μL反应体系举例，在样品制备室进行
三、数据处理
相关搜索：人BRAF基因1799T>A点突变qPCR检测试剂盒，V600E，突变检测，探针法，BRAF基因，rs113488022
BRAF基因位于人7号染色体上，该基因编码RAF家族丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。该基因编码的蛋白在调节MAPK/ERK信号通路中起作用，影响细胞分裂，分化和分泌。BRAF基因最常见的突变为1799T>A（V600E），常在黑色素瘤，非霍奇金淋巴瘤，大肠癌等肿瘤疾病中发生突变。人BRAF基因的15号外显子1799T>A（V600E）点突变与多种肿瘤疾病有关，因此研究1799T>A突变具有重要的研究意义。
- 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
- 引物和探针经过优化，分析灵敏性高，可以达到1000拷贝/μL。
- 分辨率高，能检测出5%的点突变。
- 一管式检测，突变型探针用FAM标记，野生型探针用Cy5标记。
- 同时提供野生型和突变型两种阳性对照，便于排除假阴性样品。
- 特异性高，引物和探针是根据人BRAF基因1799T>A突变设计，不会跟其他突变发生交叉反应。
- 本制品只能定性，不能定量。
- 本制品足够50次20μL体系的点突变探针法荧光定量PCR反应。
- 本制品只能用于科研。
| 组分 | 规格 |
| 2×SNP Probe qPCR Mix | 0.5mL |
| 超纯水 | 1mL |
| 人BRAF基因rs113488022位点检测引物-探针干粉 | 50T |
| 人BRAF基因15号外显子野生型阳性对照(104拷贝/μL) | 250μL |
| 人BRAF基因rs113488022位点突变型阳性对照(104拷贝/μL) | 250μL |
保存：-20℃，有效期1年。
使用前需要将引物探针干粉管短暂离心后加入220μL的自备超纯水，震荡混匀后再取用，一次没用完剩下的需要放-20℃保存。
一、样品DNA的制备
- 如果有N个样品，则进行N次纯化，得到的DNA最后溶解在TE中，并需要用NanoDrop进行定量。最后的浓度不能低于0.2μg/μL。
- 本试剂盒跟市场上大多数样品DNA提取试剂盒兼容。
二、点突变Probe qPCR反应
以20μL反应体系举例，在样品制备室进行
- 如果只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N个用于上步得到的N样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板，NC），3个用于阳性对照（PC）。
- 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子后最后加）：
成分 样品管N个 扩增NC 野生型PC 杂合型PC 突变型PC 2×SNP Probe qPCR Mix 各10μL 10μL 10μL 10μL 10μL 人BRAF基因rs113488022位点检测
引物-探针混合液各4μL 4μL 4μL 4μL 4μL N个DNA样本 各3μL 超纯水 各3μL 6μL 3μL 3μL 人BRAF基因15号外显子野生型
阳性对照(104拷贝/μL)3μL 3μL 人BRAF基因rs113488022位点突变型
阳性对照(104拷贝/μL)3μL 3μL - 盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR：
过程 温度 时间 预变性 95℃ 90sec PCR反应
(45个循环)95℃ 15sec 60℃ 60sec（采集FAM和Cy5通道的荧
光信号，淬灭基团均为TAMRA）
三、数据处理
- 实验有效性的判断：首先分析扩增NC是否有FAM或/和Cy5信号，如果有则表示实验污染，本次实验无效，无需分析所有实验数据，需要寻找原因。如果无则表示实验没有污染，再分析三个PC。如果突变型PC没有FAM扩增信号（有标准的倒S扩增曲线，下同），或野生型PC没有Cy5扩增信号，或杂合型PC没有FAM和Cy5扩增信号，则表示实验无效，不需要分析样本的数据，需要分析原因。如果三个PC正常（突变型PC有FAM扩增信号，野生型PC有Cy5扩增信号，杂合型PC有FAM和Cy5扩增信号），则实验有效，可以分析样本的数据。
- 如果荧光定量PCR仪有基因分型的自动分析模块，则进入该模块，获得每个样本的FAM值/Cy5值的荧光比值，并根据荧光比值描出散点图。荧光比值位于散点图的X轴方向的样本可以判为突变型，荧光比值将位于Y轴方向的样本可以判为野生型，荧光比值位于X轴和Y轴中间的可以判为杂合子。扩增NC的荧光比值将位于原点附近。散点图的示例如下：
- 如果荧光定量PCR仪没有基因分型的自动分析模块，则需要手动分析。首先根据Ct值判断每个样本在FAM和Cy5两个通道的扩增情况。如果FAM通道的Ct低于35，则算FAM信号有扩增。如果Ct大于35或没有Ct，则算FAM通道无扩增。Cy5通道也如此操作。然后根据扩增结果按下表判断每个样本的基因型，得到无效数据的样本需要重复：
FAM通道 Cy5通道 基因型判断 有扩增 无扩增 突变型 有扩增 有扩增 杂合子 无扩增 有扩增 野生型 无扩增 无扩增 阴性PC或无效数据
相关搜索：人BRAF基因1799T>A点突变qPCR检测试剂盒，V600E，突变检测，探针法，BRAF基因，rs113488022